葉綠素a本身對環(huán)境沒有危害，但它是估算浮游植物生物量的重要指標(biāo)，可以通過測定水中浮游植物葉綠素a的含量，掌握水體的初級生產(chǎn)力情況和富營養(yǎng)化水平，在環(huán)境監(jiān)測中，葉綠素a含量是評價水體富營養(yǎng)化的指標(biāo)之一。

水體葉綠素a測定方法有哪些？

1.分光光度法

分光光度法屬于光度法的一種，該分析方法采用的原理是物質(zhì)分子對光具有選擇吸收的特性。葉綠素a的最大吸收峰位于663nm，在一定濃度范圍內(nèi)，其吸光度與濃度符合朗伯-比爾定律，可根據(jù)吸光度-濃度之間的線性關(guān)系，計算葉綠素a的濃度。

2.熒光光譜法

葉綠素分子被紫外光照射后可發(fā)射出特征紅色熒光，其熒光強(qiáng)度與葉綠素濃度呈正比，據(jù)此可釆用熒光法進(jìn)行葉綠素a的定量分析。

3.色譜法

高效液相色譜(HPLC)法是一種廣泛應(yīng)用于化學(xué)、醫(yī)藥、生命科學(xué)等領(lǐng)域的分析手段。使用高效液相色譜法測定葉綠素a時，需要破壞測定藻類的原樣，前處理方法與分光光度法的前處理方法相似。

3.遙感監(jiān)測

水質(zhì)遙感監(jiān)測是通過監(jiān)測一定波長范圍內(nèi)的水體輻射值，定量分析水體反射光譜特征與水質(zhì)指標(biāo)間的關(guān)系，進(jìn)而構(gòu)建水質(zhì)指標(biāo)反演算法的一類方法體系。遙感技術(shù)測定葉綠素a近年來已經(jīng)被國內(nèi)外許多學(xué)者證實具有監(jiān)測范圍廣、速度快、成本低和便于進(jìn)行長期動態(tài)監(jiān)測的優(yōu)勢。

水質(zhì)葉綠素a測定步驟（分光光度法）

1.過濾

在過濾裝置上裝 還玻璃纖維濾膜，根據(jù)水體的營養(yǎng)狀態(tài)確定取樣體積，用量量筒量取一定量的混勻樣品，進(jìn)行過濾，最后用少量蒸餾水沖洗慮器壁。

2.研磨

將樣品濾膜放置于研磨裝置中，加入 3~4mL丙酮溶液，研磨至糊狀。補(bǔ)加3~4mL丙酮溶液，繼續(xù)研磨，并重復(fù)1~2次，保證充分研磨5min以上。將完全破碎后的細(xì)胞提取液轉(zhuǎn)移至玻璃刻度離心管中，用丙酮溶液沖洗研缽及研磨杵，一并轉(zhuǎn)移入離心管中，定容至10Ml。

3.浸泡提取

將離心管中的研磨提取液充分震蕩混勻后，用鋁箔包好，放置于4攝氏度下避光浸泡提取2小時以上。

4.離心

將離心管放入離心機(jī)，以3000~4000r/min的速度離心10min，然后用針式濾器過濾上清液得到葉綠素a的丙酮提取液待測。

5.空白試樣的配置：

用實驗用水按照與試樣的制備相同的步驟進(jìn)行實驗室空白試樣的制備。

6.測定：

將試樣轉(zhuǎn)移至比色皿中，以丙酮溶液為參比溶液，于波長750nm、664nm、647nm、630nm處測吸光度，測定葉綠素a含量。

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