黃曲霉毒素是一類由黃曲霉和寄生曲霉產(chǎn)生的高毒性次級(jí)代謝物，其中黃曲霉毒素 B?（AFB?）毒性最強(qiáng)，被國(guó)際癌癥研究機(jī)構(gòu)（IARC）列為 Ⅰ 類致癌物。其污染廣泛存在于花生、玉米、堅(jiān)果、食用油等農(nóng)產(chǎn)品中，因此全球 70 多個(gè)國(guó)家和地區(qū)制定了嚴(yán)格的限量標(biāo)準(zhǔn)，以保障食品安全和公眾健康。我國(guó)現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)為GB 2761-2017《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品中真菌毒素限量》，部分關(guān)鍵指標(biāo)如下：

1.AFB?

花生及其制品、玉米：20 μg/kg；

大米、食用油：10 μg/kg；

其他糧食、豆類：5 μg/kg；

嬰兒代乳食品：不得檢出（<0.025 μg/kg）。

2.AFM?（黃曲霉毒素 M?）

生乳、巴氏殺菌乳：0.5 μg/kg；

嬰幼兒配方奶粉：不得檢出（<0.025 μg/kg）。

2024 年 12 月，中國(guó)啟動(dòng) GB 2761 修訂工作，擬對(duì)特殊醫(yī)學(xué)用途配方食品中的真菌毒素限量進(jìn)行調(diào)整，但具體數(shù)值尚未正式發(fā)布。

黃曲霉毒素如何檢測(cè)呢？主要有以下幾種方法：

1.薄層分析法(TLC)

TLC法是檢測(cè)黃曲霉毒素最為經(jīng)典的方法，也是以前最為常用的方法，至今仍為一些檢測(cè)機(jī)構(gòu)所用，也是一種國(guó)標(biāo)方法。其原理是針對(duì)不同的試樣，用適宜的萃取溶劑將黃曲霉毒素從試樣中萃取出來，經(jīng)柱層析凈化后，再在薄板上展開后分離。

利用黃曲霉毒素的熒光特性，根據(jù)熒光斑點(diǎn)的強(qiáng)弱與標(biāo)準(zhǔn)比較確定其含量，對(duì)于一些組分很復(fù)雜的試樣要雙向展開，才能獲得較高的靈敏度。

TLC法設(shè)備簡(jiǎn)單，檢測(cè)費(fèi)用低，但操作繁瑣、費(fèi)時(shí)，萃取和凈化效果不理想，靈敏度差，對(duì)操作人員的身體健康存在較大程度的危害。

2.液相色譜法(HPLC)

HPLC法是近年來發(fā)展起來的一種檢測(cè)方法。其原理是在高效液相色譜儀上添加柱后衍生系統(tǒng)分離，再用熒光檢測(cè)器測(cè)定。與其配套的柱后衍生系統(tǒng)有碘衍生化法、溴衍生化法及較為先進(jìn)的電化學(xué)衍生化法和光化學(xué)衍生化法。當(dāng)前，該方法大多用免疫親和柱來凈化、分離，其凈化效果優(yōu)異。

該法能準(zhǔn)確地分離不同種類的黃曲霉毒素(例如：AFB1、AFB2、AFG1和AFM1等)，檢測(cè)速度快且定性與定量準(zhǔn)確，檢測(cè)限低，可作為仲裁法使用，但儀器設(shè)備價(jià)格昂貴，前處理方法相對(duì)繁瑣，若用到免疫親和柱則會(huì)使試樣檢測(cè)費(fèi)用增加，對(duì)操作人員的身體健康仍存在一定的危害。

3.酶聯(lián)免疫法(ELISA)

ELISA法也是近年來研究開發(fā)出來的一種較為新穎的方法。其原理是根據(jù)抗體和抗原之間特異性的免疫學(xué)反應(yīng)，最后用測(cè)定酶活力的方法來增加測(cè)定的靈敏度。

該方法檢測(cè)速度快、對(duì)人體危害小、但重復(fù)性差、試劑壽命短、需低溫保存、假陽性概率較高、需要配置專門的酶標(biāo)儀，且對(duì)一些富含鹽和脂肪的試樣需進(jìn)行額外的處理。

4.毛細(xì)管電泳法(CE)

毛細(xì)管電泳(CE)也是一種新發(fā)展起來的分析黃曲霉素的方法。該方法與激光減弱熒光檢測(cè)器(LIF)連用可很好地提高靈敏度。

Wei等用毛細(xì)管電泳一激光減弱熒光檢測(cè)器測(cè)定AFB1、AFB2、AFG1和AFG1，取得了較為理想的分離效果，其中對(duì)AFB2的測(cè)定最為靈敏。但CE法的成本較高，操作復(fù)雜，不適宜在試樣檢測(cè)中廣泛應(yīng)用。

5.熒光光度法(IAC/SFB)

IA C/SFB法也是一種常用的國(guó)標(biāo)方法。該方法的原理是利用各種黃曲霉素的熒光特性差異用熒光光度計(jì)測(cè)定試樣中黃曲霉素的含量。

該方法對(duì)檢測(cè)人員身體健康無危害，檢測(cè)速度迅速，靈敏度高，適用于大量試樣檢測(cè)，且定量準(zhǔn)確，但檢測(cè)費(fèi)用較高，需要配置專用設(shè)備，且不能對(duì)單一的毒素進(jìn)行檢測(cè)。

6.金標(biāo)試紙法

金標(biāo)試紙法，實(shí)際就是一種固相免疫分析法。其原理是利用抗體與抗原的特異性結(jié)合反應(yīng)，可一步檢測(cè)黃曲霉素。

該法可在5～10 min內(nèi)完成對(duì)試樣中黃曲霉素的定性測(cè)定，具有簡(jiǎn)單、快速的特點(diǎn)，且無須其他儀器設(shè)備的配合，既可在實(shí)驗(yàn)室中進(jìn)行檢測(cè)，也可在現(xiàn)場(chǎng)進(jìn)行實(shí)地測(cè)定，但是其檢測(cè)的準(zhǔn)確度、精度有待進(jìn)一步的研究。

7.生物傳感器法

生物傳感器是使用固定化技術(shù)將具有分子識(shí)別能力的生物活性物質(zhì)與物理化學(xué)換能器結(jié)合，可以用來探測(cè)生物體內(nèi)外的環(huán)境化學(xué)物質(zhì)或與之起特異性交互作用后產(chǎn)生響應(yīng)的一種裝置。其中利用分子間特異親和性制備的親和型生物傳感器為免疫傳感器口。

根據(jù)能量轉(zhuǎn)換器所傳導(dǎo)的物理或化學(xué)信號(hào)的不同，免疫傳感器可分為電化學(xué)免疫傳感器、光學(xué)免疫傳感器、壓電晶體免疫傳感器等。由于生物傳感器具有選擇性高、響應(yīng)快、操作簡(jiǎn)單、攜帶方便和適合于現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)等優(yōu)點(diǎn)，因此各國(guó)科研工作者正積極探索研制新型生物傳感器用于檢測(cè)黃曲霉毒素。

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